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牛外周血白細(xì)胞分離液說(shuō)明書(shū)

（細(xì)胞培養(yǎng)及分子生物學(xué)）

【產(chǎn)品規(guī)格】

200ml/Kit

貨號(hào)：WBC1086

【產(chǎn)品組成】

為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：

名稱 產(chǎn)品編號(hào) 規(guī)格

A 牛外周血白細(xì)胞分離液 200ml

B 樣本稀釋液（贈(zèng)品） 2010C1119 200ml

C 清洗液（贈(zèng)品） 2010X1118 200ml

D 紅細(xì)胞裂解液（贈(zèng)品） NH4CL2009 100ml

E 說(shuō)明書(shū) 1 份

【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】

A． 適用儀器

zui大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)

B． 耗材

產(chǎn)品名稱 產(chǎn)品貨號(hào) 產(chǎn)地

15ml 離心管散裝 339650 美國(guó) NUNC

15ml 離心管架裝 339651 美國(guó) NUNC

50ml 離心管散裝 339652 美國(guó) NUNC

50ml 離心管架裝 339653 美國(guó) NUNC

無(wú)菌膠頭滴管或塑料滴管

【檢驗(yàn)方法】

全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。

首先取抗凝血，根據(jù)樣本量大小，分以下兩種情況：

情況 A：血液樣本量小于 5ml 時(shí)，實(shí)驗(yàn)方法如下：

1. 取一支 15ml 離心管，先加入 5ml 分離液

2. 用吸管小心吸取血液樣本加于分離液液面上，400-500g，離心 20-30min（注：如改

變血液樣本及分離液用量，需相應(yīng)調(diào)整離心力及離心時(shí)間，具體離心條件需客戶自行摸

索，以達(dá)到分離效果。）

3. 離心后用吸管小心吸取所有環(huán)狀乳白色細(xì)胞層（一層或兩層），加入 10 ml 清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118），混勻細(xì)胞。250g，離心 10min。重復(fù)洗滌 2-3 次，即得所需白細(xì)胞。

4. 如有紅細(xì)胞殘留請(qǐng)使用紅細(xì)胞裂解液（產(chǎn)品編號(hào)：NH4CL2009）裂解紅細(xì)胞，具體操

作方法詳見(jiàn)“紅細(xì)胞裂解液使用說(shuō)明”。

情況 B：血液樣本量大于等于 5ml 時(shí)，實(shí)驗(yàn)方法如下：

1. 取一支適當(dāng)?shù)碾x心管，先加入與樣本等量的分離液。

2. 將血液樣本小心加于分離液之液面上，450-650g（zui大離心力可至 1000g），離心20-30min。（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液量越多，離心力越大，離心時(shí)間越長(zhǎng)，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到*分離效果。加入血液樣本后，樣本及分離液總體積不得超過(guò)離心管總體積的三分之二）。

3. 剩余步驟同“情況 A”中步驟 3 與步驟 4。

【注意事項(xiàng)】

1. 全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在取血 2h 內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，血液存放時(shí)間越長(zhǎng)，細(xì)胞分離效果越差。血液放置超過(guò) 6h 后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。

2. 本實(shí)驗(yàn)不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無(wú)靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過(guò)后的玻璃制品，因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會(huì)變成毛面，影響細(xì)胞分離效果。

3. 分離液用量大于稀釋后血液樣本時(shí)，分離效果更佳。

4. 當(dāng)血液樣本粘度過(guò)高需稀釋時(shí)，*稀釋方法：將血液與樣本稀釋液（產(chǎn)品編號(hào)：2010C1119）1:1 稀釋混勻備用。注：不當(dāng)?shù)南♂尫椒〞?huì)降低細(xì)胞得率及活性。如血液樣本經(jīng)過(guò)稀釋則分離過(guò)程中需適當(dāng)降低離心力和離心時(shí)間。

5. 如實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過(guò)低，請(qǐng)技術(shù)以尋求幫助。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

18-25℃保存，有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌，需無(wú)菌條件操作。無(wú)菌條件下操作，啟

封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。

【參考值（參考范圍）】

本實(shí)驗(yàn)白細(xì)胞提取率及純度大于 80%。

下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例，用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考。

紅細(xì)胞 白細(xì)胞 血小板

（4.0-10.0）×109

含量（個(gè)/L） （4.0-5.5）×1012 中性粒細(xì)胞 淋巴細(xì)胞 單核細(xì)胞 （1.0-3.0）×1011

50%-70% 20%-40% 3%-8%

【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】

1. 所獲得白細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。

2. 所獲得白細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。

3. 所獲得白細(xì)胞的鑒定方法A.流式細(xì)胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)C.原位雜交技術(shù)

D.PCR 技術(shù)

注：上述技術(shù)方案詳情請(qǐng)登陸本公司搜索“細(xì)胞分離、

純化、擴(kuò)增、鑒定及生物治療技術(shù)手冊(cè)”，并在說(shuō)明書(shū)項(xiàng)目欄下下載使用。

【可能存在的問(wèn)題及解決方法】

1. 由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問(wèn)題及解決方案如下表所示：

出現(xiàn)情況 出現(xiàn)原因 建議解決方案

離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層 轉(zhuǎn)速過(guò)小或離心時(shí)間過(guò)短 適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速

離心后目的細(xì)胞存在于分離液中 轉(zhuǎn)速過(guò)大或離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)

離心后白環(huán)層彌散 細(xì)胞密度過(guò)大 調(diào)整細(xì)胞密度

離心后白環(huán)層太淺或看不見(jiàn) 細(xì)胞密度過(guò)小

2. 本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對(duì)離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)，恒定離心時(shí)間，對(duì)離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。

3. 本分離液依照標(biāo)準(zhǔn)，全部使用藥用級(jí)原料，性能指標(biāo)與國(guó)產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不*的情況，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。

注：在對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)，直至達(dá)到分離效果，

離心力zui小不得小于 400g，zui大不得大于 1200g。離心時(shí)間以 20-30min 為準(zhǔn)。